如何提高CHO细胞的表达产物产量及纯度?
如何提高CHO细胞的表达产物产量及纯度?
问题列表:
如何进行CHO细胞的转染以提高蛋白质的表达?
什么样的培养条件可以最大化CHO细胞的生长和蛋白质产生?
有哪些策略可以提高CHO细胞生产的特异性抗体的纯度?
为何需要进行CHO细胞的定量和质量控制,以及如何进行?
如何通过基因编辑技术提升CHO细胞的生产效率?
如何进行CHO细胞的转染以提高蛋白质的表达?
什么样的培养条件可以最大化CHO细胞的生长和蛋白质产生?
有哪些策略可以提高CHO细胞生产的特异性抗体的纯度?
为何需要进行CHO细胞的定量和质量控制,以及如何进行?
如何通过基因编辑技术提升CHO细胞的生产效率?
首先,选择对细胞影响较小但效率高的转染方法,比如使用脂质体介质或电穿孔技术。其次,选择适合的表达载体,该载体应包含CHO细胞优化的启动子、Kozak 序列以及增强子等元件,并且载体应包含尽可能多的稳定性元件以确保转染后的基因在细胞中的稳定表达。
优化培养条件涉及到诸多因素,包括pH值、氧气浓度、温度、营养成分等。比如说,将pH维持在7.0-7.2,氧气浓度维持在40-60%,温度维持在37℃,都可能有助于CHO细胞的生长和蛋白质产生。此外,定制营养富集的培养基——包括氨基酸、维生素、糖和脂肪酸等也是常用的策略。
应运用蛋白质纯化技术,包括亲和素色谱(以抗体对特定抗原的亲和性为基础),离子交换色谱(以蛋白质的电荷差异为基础),以及凝胶过滤色谱(以分子大小为基础)。此外,代谢控制、转录控制以及转译控制等基因表达调控手段也可以提高抗体的表达纯度。
首先,定量有助于了解细胞生长和分裂的状况,而质量控制则可以确保所获得的蛋白质等产品的性能。常用的定量方式有可见光透射和脱氢酶活性法,而质量控制主要包括细胞形态观察、细胞活性测定、以及蛋白质生成及纯度测定等。
借助CRISPR/Cas9等基因编辑技术,可修改细胞中的关键基因并优化基因表达。首先通过基因编辑技术,我们可以提高CHO细胞对蛋白质表达的特异性,降低其他非目标蛋白质的干扰。其次,我们也可通过基因编辑技术提高蛋白质表达的稳定性。例如,可以通过敲除某些影响基因稳定性和转录的因子,如DNA甲基化和组蛋白乙酰化等酶,改变基因的表达环境,以提高蛋白产量。